QuantScript RT ڪٽ

A-1 RNA خراب ٿي ويو آھي

high صاف ڪريو اعليٰ معيار جو RNA بغير آلودگيءَ سان. اھو مواد جنھن مان آر اين اي ڪ isيو وي ٿو جيترو تازو ھجڻ گھرجي آر اين اي جي زوال کي روڪڻ لاءِ. تجزيو ڪيو RNA جي سالميت تي خراب ٿيل جيل تي RT رد عمل کان ا. آر اين اي ڪctionڻ کان پوءِ ، ان کي 100 for فارميڊ ​​۾ ذخيرو ڪيو وي. جيڪڏهن RNase inhibitor استعمال ڪيو و ،ي ٿو ، حرارتي حرارت هجڻ گھرجي <45 ° C ، ۽ pH 8.0 کان گھٽ هجڻ گھرجي ، otherwiseي صورت ۾ منع ڪندڙ تمام پابند RNase ڏيندو. ان کان علاوه ، RNase inhibitor کي شامل ڪيو و solutionsي حلن ۾ containing 0.8 mM DTT تي.

A-2 RNA تي مشتمل آھي ريورس ٽرانسڪرپشن رد عمل جا روڪيندڙ

ever ريورس ٽرانسڪرپشن انابيٽرز ۾ شامل آھن SDS ، EDTA ، گليسيرول ، سوڊيم پيرو فاسفٽ ، اسپرمائيڊائن ، فارميائيڊ ، گوانڊائن نمڪ ، وغيره ڪنٽرول آر اين اي کي نموني سان ملايو ، ۽ ڪنٽرول آر اين اي رد عمل سان پيداوار جي compareيٽ ڪريو جانچڻ لاءِ ته ڪو روڪيندڙ آھي يا نه. RNA ورن کي Washوئي 70٪ (v/v) ايٿانول سان.

A-3 پرائمر جي ناکافي انيلنگ استعمال ڪئي وئي سي ڊي اين اي جي پھرين ڪنڊ کي hesھڻ لاءِ

etوجو ته انيلنگ جو گرمي پد مناسب آھي پرائمرن لاءِ استعمال ۾ استعمال ٿيل. بي ترتيب hexamers لاءِ ، سفارش ڪئي وئي آھي ته گرمي پد 25 ° C تي رکو 10 منٽ ا before رد عمل جي حرارت تائين پھچڻ کان ا. جين لاءِ مخصوص پرائمرز (GSP) لاءِ ، ڪوشش ڪريو Gيا GSP ، يا سوئچ ڪريو oligo (dT) يا بي ترتيب hexamer.

A-4 RNA شروع ڪرڻ جي نن amountي رقم

RNA جي مقدار کي وايو. آر اين اي نمونن لاءِ 50 اين جي کان گھٽ ، 0.1 μg کان 0.5 μg acetyl BSA پھرين اسٽرڊ سي ڊي اين اي سنٿيسس ۾ استعمال ٿي سگھي ٿو.

A-5 ٽارگيٽ تسلسل جو تجزيو ڪيل ٽشوز ۾ اظهار نه ڪيو ويو آهي.

- otherين بافتن جي ڪوشش ڪريو.

A-6 PCR رد عمل ناڪام

-twoن مرحلن واري RT-PCR لاءِ ، PCR مرحلي ۾ سي ڊي اين اي ٽيمپليٽ رد عمل جي مقدار جي 1/5 کان و cannotيڪ نه ٿو ٿي سگھي.

A-1 پرائمر ۽ ٽيمپليٽس جو غير مخصوص انيلنگ

-پرائمر جي 3'-پ shouldاڙيءَ ۾ 2-3 ڊي جي يا ڊي سي نه ھجڻ گھرجي. استعمال ڪريو جين جي مخصوص پرائمر کي پھرين ڪنڊن جي ترکیب ۾ بي ترتيب پرائمر يا اوليگو (ڊي ٽي) جي بدران. استعمال ڪريو ھڪڙو و anيڪ annealing گرمي پد پھرين ڪجھ چڪن ۾ ، ۽ پوءِ ھڪڙو گھٽ annealing حرارت. استعمال ڪريو پي سي آر لاءِ گرم شروع ٿيندڙ طاق ڊي اين اي پوليمريز رد عمل جي خاصيت کي بھتر ڪرڻ لاءِ.

A-2 جين جي مخصوص پرائمرن جي ناقص ڊيزائن

سا——يو اصولن تي عمل ڪريو پرائمري ڊيزائين forاھڻ لاءِ.

A-3 RNA آلوده جينومڪ DNA سان

reat ٽرين RNA سان PCR- گريڊ DNase I. سيٽ ڪريو ڪنٽرول رد عمل بغير ريورس ٽرانسڪرپشن ڊي اين اي آلودگي کي detectولڻ لاءِ.

A-4 پرائمر ڊيمر mingاھڻ

pri ڊيزائين پرائمر بغير 3 مڪمل ڪرڻ جي.

A-5 تمام گھڻو Mg²⁺ توجه

pt Optimize Mg²⁺ هر ٽيمپليٽ ۽ پرائمر ميلاپ لاءِ توجه

A-6 غير ملڪي ڊي اين اي سان آلوده

استعمال ڪريو ايروسول مزاحمتي ٽوٽڪا ۽ UDG اينزائمز.

A-1 پهرين strand پيداوار جو مواد تمام گھڻو آھي

- روايتي PCR رد عمل واري مرحلي ۾ پھرين اسٽرڊ پراڊڪٽ جي مقدار کي گھٽايو.

PCR رد عمل ۾ A-2 تمام گھڻي پرائمر رقم

- پرائمر ان پٽ کي گھٽ ڪريو.

A-3 تمام گھڻا چڪر

PCR رد عمل جي حالتن کي بهتر بڻايو ۽ PCR سائيڪل جو تعداد گھٽايو.

A-4 تمام گھٽ annealing گرمي پد

an غير مخصوص شروعات ۽ وا. کي روڪڻ لاءِ اينيلنگ جو گرمي پد وايو.

A-5 غير مخصوص وlائڻ oligonucleotide ٽڪرن جي Dاهيل DNase ڊي اين اي جي خرابي مان DNAاھر ڪ highو اعليٰ معيار وارو RNA ڊي اين اي آلودگي کي روڪڻ لاءِ.

RT-PCR آھي ريورس ٽرانسڪرائيب RNA کي cDNA ۾ ، ۽ پوءِ استعمال ڪريو ريورس ٽرانسڪرائيڊ cDNA کي PCR رد عمل لاءِ ٽيمپليٽ طور ھدف ٽڪرا وlائڻ لاءِ. چونڊيو يا ته بي ترتيب پرائمر ، Oligo dT ۽ جين مخصوص پرائمر تجربي جي مخصوص حالتن مطابق. مٿيان س priئي پرائمر استعمال ڪري سگھجن ٿا مختصر يوڪيريٽوڪ سيل mRNA لاءِ بغير وارين پن جي ساخت جي.

رينڊم پرائمر: مناسب ڊگھي آر اين اي لاءِ وارن جي پٽي جي جوڙجڪ سان ، ۽ گڏوگڏ س allني قسمن جا آر اين اي جيئن ته آر آر اين اي ، ايم آر اين اي ، ٽي آر اين اي ، وغيره اھي خاص طور تي استعمال ٿيندا آھن RT-PCR رد عمل لاءِ ھڪڙي ٽيمپليٽ جي.

Oligo dT: مناسب RNA لاءِ PolyA tailing سان (prokaryotic RNA ، eukaryotic Oligo dT rRNA ۽ tRNA وٽ PolyA دم ناھن). Becauseو ته Oligo dT پابند آھي PolyA دم لاءِ ، آر اين اي نمونن جو معيار اعليٰ ھجڻ گھرجي ، ۽ انھيءَ ڪري به گھٽ گھٽتائي جو مقدار گھٽائي fullڏيندو پوري ڊيگھ جي سي ڊي اين اي جي مقدار کي.

جين مخصوص پرائمر: ٽيمپليٽ تسلسل جو ضمني ، مناسب حالتن لاءِ جتي ھدف وارو تسلسل معلوم ٿئي.

اتي twoه طريقا آهن:

1. اندروني حوالي جو طريقو: نظريي ۾ ، سي ڊي اين اي مختلف ڊيگھن جا ڊي اين اي ٽڪرا آھن ، تنھنڪري اليڪٽرروفورسس جو نتيجو سمير آھي. جيڪڏھن آر اين اي جي گھٽتائي گھٽ آھي ، ڪا به پيداوار اليڪٽرروفورسس ۾ نه ڏيکاريندي ، پر ھن جو مطلب اھو ناھي ته ڪا به پيداوار پي سي آر ذريعي وي نه ويندي. عام طور تي ، اندروني حوالو استعمال ڪري سگھجي ٿو cDNA کي ولڻ لاءِ. جيڪڏھن اندروني حوالي جا نتيجا آھن ، سي ڊي اين اي جي معيار بنيادي طور تي ضمانت ڏئي سگھجي ٿي (ڪجھ ڪيسن ۾ ، جيڪڏھن ھدف وارو جين ٽڪرو تمام ڊگھو آھي ، اتي استثنا ٿي سگھن ٿا).

2. جيڪڏھن ڪو geneاڻايل جين آھي ھن ٽيمپليٽ پاران وايو ويو آھي ، ان جي تصديق ڪري سگھجي ٿي ھن جين جي پرائمرن سان. اندروني حوالي جي وااري جو لازمي طور مطلب ناهي ته ڪو به مسئلو ناهي cDNA سان. Becauseو ته اندروني حوالي سان آھي وڏي مقدار ۾ cDNA ، اھو و easyائڻ آسان آھي. جيڪڏهن سي ڊي اين اي جزوي طور تي مختلف سببن جي ڪري خراب ٿي و ،ي ٿو ، امڪاني نقطه نظر کان ، گھٽ اڪثريت واري ٽارگيٽ جينز جا پي سي آر نتيجا تمام متاثر ٿيندا. جيتوڻيڪ اندروني حوالو ا stillا گھڻو آھي گھڻي ۾ ، واlارو شايد متاثر نه ٿيندو.

RNA جو جزوي طور گھٽجڻ. سالميت کي وليو ۽ پاڪ ڪريو RNA جي

مختلف قسمن جي آر اين اي جو مواد مختلف ٿي سگھي ٿو ، پر عام طور تي ، ڪedيل ڪل آر اين اي ۾ electroه واضح 28S ۽ 18S بئنڊز ھئڻ گھرجن جيل اليڪٽرروفورسس ۾ ، ۽ ا bandئين بئنڊ جي چمڪ twiceيڻي ھجڻ گھرجي جيتري بعد ۾. 5S بينڊ اشارو ڪري ٿو ته RNA کي خراب ڪيو ويو آھي ، ۽ ان جي چمڪ تناسب جي درجي جي تناسب آھي. اندروني حوالي جي ڪامياب واlاري جو مطلب اھو ڪونھي ته آر اين اي سان ڪو مسئلو ناھي ، becauseو ته اندروني حوالو گھڻي مقدار ۾ آھي ، آر اين اي کي ان وقت تائين وائي سگھجي ٿو جيستائين انحطاط سخت نه ھجي. او ڊي₂₆₀/او ڊي₂₈₀خالص آر اين اي جو تناسب جيڪو اسپيڪٽروفٽو ميٽر ذريعي ماپي و 1.ي ٿو 1.9 ۽ 2.1 جي وچ ۾. RNA ۾ پروٽين جي ناپاڪائيءَ جو ھڪڙو نن amountڙو مقدار تناسب گھٽ ڪندو. جيستائين قيمت تمام گھٽ ناهي ، RT متاثر نه ٿيندو. RT لاءِ س matters کان و mattersيڪ اھم Rالھ آھي RNA سالميت.

اندروني ريفرنس جين جي توسيع ر indicateو ظاھر ڪري سگھي ٿي ته RT ڪامياب ٿي ويو آھي ، پر اھو ضروري طور تي cDNA strand جي معيار سان لااپيل ناھي. Becauseو ته اندروني حوالا ٽڪرا عام طور تي سائيز ۾ نن andا ۽ اظهار ۾ اعليٰ آھن ، اھي آسان آھن ڪامياب ٿيڻ لاءِ ريورس ٽرانسڪرپشن ۾. بهرحال ، ٽارگيٽ جين جو سائز ۽ اظهار مختلف آهي جين کان جين تائين. سي ڊي اين اي ڪيفيت جو فيصلو نه ٿو ڪري سگھجي صرف اندروني حوالي سان خاص طور تي ٽارگيٽ ٽڪرن لاءِ 2 kb کان ڊگھو.

ڪجھ نمونن ۾ آھن پيچيده ثانوي اڏاوتون ، يا آھن امير GC مواد ، يا آھن گھٽ گھٽتائيءَ سان قيمتي. اهڙين حالتن ۾ ، مناسب ريورس ٽرانسڪرپٽ کي چونڊيو و beي ٽارگيٽ ٽڪڙي جي ماپ ۽ نموني مطابق. آر اين اي ٽيمپليٽس لاءِ اعليٰ GC مواد ۽ پيچيده ثانوي structureانچي لاءِ ، اھو مشڪل آھي ثانوي structureانچي کي گھٽ درجه حرارت تي ، يا عام ريورس ٽرانسڪرپٽ سان. ھنن ٽيمپليٽن لاءِ ، Quant Reverse Transcriptase کي منتخب ڪري سگھجي ٿو ، sinceو ته ان جي ريورس ٽرانسڪرپشن ڪارڪردگي واضح طور تي M-MLV سيريز ريورس ٽرانسڪرپٽيز کان بھتر آھي ، جيڪو مختلف آر اين اي ٽيمپليٽس کي موثر طريقي سان نقل ڪري سگھي ٿو ۽ آر اين اي کي سي ڊي اين اي ۾ پھريائين اسٽينڊ ۾ وcribe ۾ و extent حد تائين نقل ڪري سگھي ٿو. جڏھن عام ريورس ٽرانسڪرپٽ ڪٽ استعمال ڪيو و 20ي ، 20 μl سسٽم ر effectivelyو مؤثر طريقي سان ٽرانسڪرائب ڪري سگھي ٿو 1 μg ڪل RNA جو. مھرباني ڪري attentionيان ڏيو و kit ۾ و R RT گنجائش جي ڪٽ جي. جيڪڏھن ٽيمپليٽ و inيڪ شامل ڪيو ويو آھي ، ريورس ٽرانسڪرپشن RNA کي گھڻي کثرت سان پسند ڪندي. تنھنڪري ، اھو بھتر آھي ته سسٽم جي و capacity ۾ و capacity گنجائش کان ويڪ نه ھجي.

A-1 طئي ڪيو ته آر اين اي سخت خراب ٿي ويو آهي ۽ جيڪڏهن آر ٽي ڪامياب آهي

عام طور تي ، اندروني حوالن جي واlاري جي ناڪاميءَ جو سبب اڪثر آر اين اي جي تباھيءَ جي ڪري ٿئي ٿو. هڪ possibleيو ممڪن سبب آهي ريورس ٽرانسڪرپشن ناڪامي. اندروني حوالو استعمال نٿو ڪري سگھجي ھڪڙي معيار جي طور تي سي ڊي اين اي سنگل اسٽينڊ جي معيار کي پرکڻ لاءِ ، پر اھو استعمال ڪري سگھجي ٿو ھڪڙي معيار جي طور تي فيصلو ڪرڻ لاءِ ته reverseا ريورس ٽرانسڪرپشن ڪامياب آھي جيڪڏھن آر اين اي معيار جو ڪو مسئلو ناھي. ريورس ٽرانسڪرپشن جي عمل ۾ س important کان اھم شيءِ آھي ھڪڙي مسلسل درجه حرارت ۽ مسلسل رد عمل جو نظام برقرار رکڻ لاءِ رد عمل جي ڪارڪردگي کي بھتر ڪرڻ لاءِ.

A-2 اهو طئي ڪيو ته internalا پرائمر اندروني ريفرنس جينز کي و reliableائڻ لاءِ قابل اعتماد آهن ۽ جيڪڏهن پي سي آر ۾ استعمال ٿيندڙ ريجنٽس سان ڪو مسئلو آهي.

نسبتي مقدار لاءِ ، آر اين اي کي لازمي طور تي ريورس ٽرانسڪرپشن کان ا quant مقدار ۾ آڻڻ گھرجي ، جيڪا پڻ گھربل آھي ڪيترن ريورس ٽرانسپريشن ڪٽس ۾ ، مثال طور ، 1 μg جي حساب سان آر اين اي ان پٽ کي مقدار ڏيو. جيئن ته ريورس ٽريڪٽيڊ سي ڊي اين اي ھڪڙو مخلوط حل آھي ، بشمول آر اين اي ، اوليگو ڊي ٽي ، انزائم ، ڊي اين ٽي پي ، ۽ ا DNAا به ٿورڙو ڊي اين اي رھجي ويو آھي ، انحراف جو سبب بڻجندو ، تنھنڪري اھو ناممڪن آھي ته صحيح طور تي سي ڊي اين اي کي درست ڪري. تنھنڪري ، آر اين اي جي مقدار ضروري آھي. غور ڪرڻ ريورس ٽرانسڪرپشن افاديت سا samplesي آھي مختلف نمونن ۾ ، حاصل ڪيل سي ڊي اين اي جي مقدار سا sameي ھجڻ گھرجي ، ۽ مقداري تجزيو ڏيکاري سگھي ٿو مختلف جين جي اظهار جي سطحن جو موازنہ سا totalئي مقدار ۾ ڪل آر اين اي ۾. جڏهن پرفارمنس فلوروسينس مقداري PCR انجام ڏئي رهيو هجي ، مقدار جي سي ڊي اين اي جي ضرورت نه هجي ريورس ٽرانسپشن کان پوءِ theو ته اندروني ريفرنس جين کي ريفرنس طور ڪم ڪري سگهجي ٿو.

اھو بنيادي طور تي جينز سان لااپيل آھي ، ۽ ڊگھي ٽڪڙي جي ريورس ٽرانسڪرپشن اڪثر جينز لاءِ ممڪن ناھي. پهرين ، ريورس ٽرانسڪرپشن جي ڪارڪردگي PCR جي farيٽ ۾ تمام گھٽ آهي. lyيو ، GC امير علائقو ۽ ثانوي structureانچو ڪيترن ئي جينز کي محدود ڪري ٿو reverseئي ريورس ٽرانسڪرپشن ۽ PCR کي. آخرڪار ، پي سي آر جي ايمانداري ۽ واlاري جي ڪارڪردگي سا difficultئي وقت ضمانت ڏيڻ مشڪل آهي. ريورس ٽرانسڪرپشن جي عمل ۾ ، ڪو به ضمانت نٿو ڏئي سگھي ته ڊگھي ٽڪرا گھٽ ڪاپي جينز لاءِ ، خاص طور تي oligo dT استعمال ڪندي. جيئن ته 5 'UTR و moreيڪ GC سان ، اھو ا evenا و moreيڪ مشڪل آھي. تنھنڪري ، ا stillا تائين اھو ھڪڙو معقول طريقو آھي ته ٽرانسڪرپٽ کي بي ترتيب پرائمرن سان ريورس ڪيو و findي ، ھدفاتي ٽڪرن ۾ قدرتي avوڙ واريون سائيٽون ،وليو ، ٽڪرن ذريعي وlايو ، ۽ پوءِ پابندي هضم ۽ ليگيشن انجام ڏيو. عام طور تي ، اھو مشڪل آھي ته 2 kb کان و fragيڪ ٽڪرن کي س directlyو سنئون و butايو و butي ، پر اھو حاصل ڪرڻ سدائين ناممڪن ناھي: 1. س all کان پھرين ، RNA/mRNA جي سالميت جي ضمانت ڏيو ، ۽ TRIZOL ڪctionڻ کي ترجيح ڏني وي ٿي. 2.M-MLV RT-PCR ڪٽ س directlyو استعمال ڪري سگھجي ٿي. وneايو اينيلنگ جو وقت ۽ و increaseايو سائيڪل جو تعداد و theائڻ جي عمل ۾ صحيح طريقي سان. متبادل طور تي ، estھيل PCR لا appliedو ڪري سگھجي ٿو ، يا ھڪڙو يا reactionsه رد عمل سرانجام ڏئي سگھجن ٿا س first کان پھريائين مناسب توسيع ٿيل تشريح ۽ توسيع جو وقت عام PCR وlائڻ کان پھريائين ، جيڪو ٽڪرن کي و toائڻ ۾ مدد ڪري سگھي ٿو. پوليميرس جي ايمانداري تي يان ڏيو. 3. ڊگھي طاق کي استعمال ڪري سگھجي ٿو PCR ۾ مثالي نتيجا حاصل ڪرڻ لاءِ. 4. پروٽين جي اظهار جي درخواست لاءِ ، اعليٰ مخلص پوليمريز لا beو ٿيڻ گھرجي.

اتي twoه قسم آھن ريورس ٽرانسڪرپٽيز پاران پيش ڪيل TIANGEN پاران: Quant/King RTase ۽ TIANScript M-MLV. انھن جي وچ ۾ بنيادي فرق آھي ٽيمپليٽس جو ان پٽ مقدار. Quant هڪ منفرد ريورس ٽرانسڪرپٽ آهي ، جيڪو عام طور تي استعمال ٿيندڙ M-MLV کان مختلف آهي جيڪو مولوني مورائن ليوڪيميا وائرس مان نڪتل آهي. Quant ھڪڙو نئون اعليٰ ڪارڪردگي وارو ريورس ٽرانسڪرپٽ آھي جنھن جو expressedيھر اظهار انجنيئرنگ ايشيريچيا ڪولي پاران ڪيو ويو آھي. مقدار مناسب آھي 50 ng-2 Rg RNA کي و reverseائڻ لاءِ اعليٰ ريورس ٽرانسڪرپشن سرگرمي ۽ اعليٰ پيداوار سان. عام MMLV يا AMV جي مقابلي ۾ ، Quant جي س biggest کان وڏي خصوصيت ھي آھي ته ان جو تمام مضبوط تعلق آھي RNA ٽيمپليٽس سان ۽ نقل ڪري سگھي ٿو پيچيده ٽيمپليٽ کي بغير تيز درجه حرارت جي تڪرار جي. ٽيمپليٽس لاءِ اعليٰ GC مواد سان ، ريورس ڪارڪردگي و higherيڪ آھي. بھرحال ، ھن ريورس ٽرانسڪرپٽ ۾ آھي RNase H سرگرمي ، جيڪا متاثر ڪري سگھي ٿي سي ڊي اين اي پراڊڪٽ جي ڊيگھ (مناسب <4.5 kb ٽيمپليٽس لاءِ). روايتي ريورس ٽرانسڪرپشن لاءِ ، TIANScript MMLV ريورس ٽرانسڪرپٽ سفارش ڪئي وئي آھي. ھي RTase ھڪڙو تبديل ٿيل اينزائم آھي جنھن ۾ تمام ڪمزور RNase H سرگرمي آھي ، جيڪا مناسب آھي ڊگھي (> 5 kb) سي ڊي اين اي جي ترکیب لاءِ.

ھڪڙي قدم جي ريورس ٽرانسڪرپشن ۽ PCR امپليفيشن مڪمل ٿي ويندي سا tubeئي ٽيوب ۾ سي ڊي اين اي سنٿيسس ۽ ايمپليفيشن جي وچ ۾ ٽيوب ڪوري کولڻ کان سواءِ ، جيڪا آلودگي کي گھٽ ڪرڻ ۾ مددگار آھي. جتان حاصل ڪيل سDئي سي ڊي اين اي نمونا وlائڻ لاءِ استعمال ڪيا ون ٿا ، حساسيت و higherيڪ آھي ، گھٽ ۾ گھٽ 0.01 پي جي کل آر اين اي سان. ڪامياب هڪ قدم RTPCR لاءِ ، جين مخصوص پرائمر عام طور تي استعمال ڪيا ويندا آھن سي ڊي اين اي سنٿيسس شروع ڪرڻ لاءِ. -ن مرحلن وارو طريقو ، يعني ريورس ٽرانسڪرپشن ۽ پي سي آر وlائڻ twoن مرحلن ۾ ڪيو ويندو آھي. پھريائين ريورس ٽرانسڪرپشن ڪئي ويندي آھي ھڪڙي آر اين اي ٽيمپليٽ مان سي ڊي اين اي حاصل ڪرڻ لاءِ ، ۽ حاصل ڪيل سي ڊي اين اي آھي ھڪڙي يا و differentيڪ مختلف پي سي آر رد عملن جي تابع. -ن مرحلن وارو طريقو استعمال ڪري سگھي ٿو اوليوگو (ڊي ٽي) يا بي ترتيب پرائمر سي ڊي اين اي جي پھرين ڪنڊ جي ترکیب کي ھدايت ڪرڻ لاءِ ، ۽ نقل ڪري سگھي ٿو س mني mRNA معلومات کي ھڪڙي نموني مان نقل ڪري.