ماؤس ٽشو س Directو PCR ڪٽ

ٽارگيٽ جين جي تيز رفتار وlائڻ س directlyو سنئون جانورن جي ٽشو جي نمونن مان بغير ڪctionڻ جي.

ماؤس ٽشوز س Directو پي سي آر ڪٽ هڪ منفرد پيڪيجنگ ڊيزائن کي اپنائي ٿي جنهن ۾ شامل آهن س rapidئي ريجنٽز لاءِ تيزيءَ سان جينومڪ ڊي اين اي تيار ڪرڻ ۽ پي سي آر وlائڻ. اھو لا applicableو ٿئي ٿو ھڪڙي مرحلي واري جينوم ڊي اين اي صاف ڪرڻ لاءِ ماؤس ٽشوز (دم ، ڪن ۽ پير) ۽ بعد ۾ پي سي آر وlائڻ ۽ ectionولڻ لاءِ. س processي عمل ۾ شامل ناھي homogenization ، shڪڻ ، رات جو ھضم ٿيڻ ، نامياتي سالوينٽس ڪctionڻ ، ايٿانول ورن يا ڪالمن صاف ڪرڻ جا مرحلا. مستحڪم نتيجا حاصل ڪري سگھجن ٿا سادي ۽ تيز آپريشنن سان.

2 × Dir PCR MasterMix هن ڪٽ پاران مهيا ڪيل هڪ انتهائي مطابقت رکندڙ PCR ريجنٽ آهي جيڪو موثر ۽ خاص طور تي ڊي اين اي کي و ampائي سگھي ٿو بغير ضرورتن کي هٽائڻ جي. ھن ريجنٽ تي مشتمل آھي ھڪڙو اينٽي باڊي تبديل ٿيل گرم شروعٽيڪ ڊي اين اي پوليميرس ، ڊي اين ٽي پيز ، MgCl₂، بفرز ، گڏوگڏ PCR رد عمل لاءِ وcerائڻ وارو ، اصلاح ڪندڙ ۽ اسٽيبلائيزر. PCR رد عمل سرانجام ڏئي سگھجي ٿو صرف شامل ڪرڻ سان اٽڪل ڪ extractيل ٽيمپليٽ ۽ مخصوص پرائمرن ۾. س processو عمل تيز ، سادو ، حساس ، مخصوص ۽ مستحڪم آھي ، جيڪو خاص طور تي اعليٰ ذريعن جي اسڪريننگ لاءِ موزون آھي. 2 × Dir PCR MasterMix تي مشتمل آھي premix electrophoresis dye ، انھيءَ لاءِ ته PCR پروڊڪٽس رد عمل کان پوءِ س electroو سنئون اليڪٽرروفورسس جي چڪاس لاءِ موڪلي سگھجن. PCR پروڊڪٽ جي 3 'پ endاڙيءَ ۾ A-tailing آھي ، جيڪو TA ڪلوننگ لاءِ استعمال ڪري سگھجي ٿو.

لي. نه	پيڪنگ سائيز
4992531	20 µl × 50 rxn
4992532	20 µl × 200 rxn

اسان کي اي ميل موڪليو

پيداوار جي تفصيل

ڪم جو وهڪرو

تجرباتي مثال

سوال

پيداوار ٽيگ

خاصيتون

■ سادو ۽ تيز: جينومڪ ڊي اين اي کي تيزيءَ سان ماؤس جي بافتن مان ڪ 60ي سگھجي ٿو 60 منٽن ۾ بغير مائع نائيٽروجن پيسڻ ۽ نامياتي سالوينٽس ڪctionڻ جي.
application وسيع ايپليڪيشن: اھو مناسب آھي ھڪڙي قدم جينوومڪ ڊي اين اي کي ماؤس جي دم ، ڪن ، پير ۽ tين بافتن مان ڪctionڻ لاءِ.
■ اعليٰ خصوصيت: ھن پراڊڪٽ ۾ استعمال ٿيندڙ طاق پوليميرس آھي ھڪڙو اينٽي باڊي تبديل ٿيل گرم شروع ٿيندڙ انزائم ، اعليٰ ٽيمپليٽ ۽ پرائمر لاinityاپو ۽ وlائڻ جي خاصيت سان ، جيڪو خاص طور تي جينوٽائپنگ ۽ ٽرانسجنڪ سificationاڻپ لاءِ موزون آھي.
■ جيني جي سectionاڻپ: پيداوار آسان آھي قابل اعتماد نتيجن سان هلائڻ لاءِ ، ۽ اھو خاص طور تي موزون آھي اعليٰ نتيجن جي تجزيي ۽ ماؤس ٽشوز جي ectionولا لاءِ.

س Allئي شيون ODM/OEM لاءِ ڪسٽمائيز ٿي سگھن ٿيون. تفصيل لاءِ ،مھرباني ڪري ڪلڪ ڪريو ڪسٽمائيز سروس (ODM/OEM)

ا Previousيون: بلڊ س Directو PCR ڪٽ

ا Nextيون: فاسٽ سائيٽ ھدايت ڪيل Mutagenesis Kit

Experimental Example

ماؤس ٽشوز س Directو PCR ڪٽ استعمال ڪرڻ ۽ سپلائر A کان لا productاپيل پراڊڪٽ استعمال ڪرڻ لاءِ 1000 bp ، 2000 bp ۽ 3000 bp ٽڪرن کي ترتيب سان ماؤس جي دم ، ماؤس ڪن ۽ چوٿين دم مان. نتيجو ظاھر ڪيو ته ماؤس ٽشوز س Directو PCR ڪٽ آھي بھترين خاصيت ۽ ڪاميابي جي شرح.

سوال: ڪوبه وlائڻ وارو بئنڊ ناهي

A-1 سانچو

■ ٽيمپليٽ تي مشتمل آھي پروٽين جون نجاستون يا Taq inhibitors.

template ٽيمپليٽ جي atاھڻ مڪمل نه آھي —— مناسب طور تي وatايو وatي atاھڻ جي درجه حرارت ۽ ڊگھو atاھڻ جو وقت.

■ ٽيمپليٽ خراب ڪرڻ the ٽيمپليٽ -يهر تيار ڪريو.

A-2 پرائمر

pri پرائمر جي ناقص معيار e پرائمر کي -يھر ھرايو.

■ پرائمر تباھي —— اعلي ڪنسنٽريشن پرائمر کي بچايو نن smallي مقدار ۾. گھڻن منجمد ۽ پگھلڻ کان پاسو ڪريو يا ڊگھي عرصي تائين 4 ° C cryopreserved.

pri پرائمر جي نامناسب ڊيزائن (مثال طور پرائمر جي ڊيگھ ڪافي ناھي ، پرائمر جي وچ ۾ imeھيل ڊيمر وغيره) -ري ڊيزائين پرائمر (پرائمر ڊيمر ۽ سيڪنڊري ساخت جي avoidاھڻ کان پاسو ڪريو)

A-3 مگ²⁺توجه

■ مگ²⁺ ڪنسنٽريشن تمام گھٽ آهي ro خاص طور تي Mg و increaseايو²⁺ڪنسنٽريشن: ايم پي کي وايو²⁺ 1 mM کان 3 mM تائين رد عمل جي ھڪڙي سلسلي سان ڪنسنٽريشن 0.5 mM جي وقفي سان و Mg ۾ و Mg Mg جو تعين ڪرڻ لاءِ²⁺ هر ٽيمپليٽ ۽ پرائمر لاءِ توجه.

A-4 انيلنگ جو گرمي پد

■ تيز annealing گرمي پد کي متاثر ڪري ٿو پرائمر ۽ ٽيمپليٽ جي پابند. -انيلنگ جي درجه حرارت کي گھٽايو ۽ حالت کي بهتر ڪريو 2 ° C جي درجه بندي سان.

A-5 وensionائڻ جو وقت

■ مختصر توسيع وقت extension و extensionائڻ جو وقت وايو.

سوال: ڪوڙو مثبت

Phenomena: منفي نمونا پڻ ڏيکارين ٿا ٽارگيٽ تسلسل بينڊ.

PCR جي A-1 آلودگي

target ٽارگيٽ تسلسل يا وlائڻ وارين شين جي پار آلودگي fully احتياط سان پائپ نه ڪيو و targetي ٽارگيٽ تسلسل وارو نمونو منفي نموني ۾ يا انھن کي اrليو سينٽرفيوج ٽيوب مان. ريجينٽس يا سامان پاڻمرادو beھيل ھئڻ گھرجي موجوده نيوڪليڪ ايسڊز کي ختم ڪرڻ لاءِ ، ۽ آلودگيءَ جو وجود منفي ڪنٽرول تجربن ذريعي طئي ٿيڻ گھرجي.

■ Reagent contamination liAliquot reagents ۽ اسٽور گھٽ درجه حرارت تي.

A-2 وزيراعظمr

■ مگ²⁺ ڪنسنٽريشن تمام گھٽ آهي ro خاص طور تي Mg و increaseايو²⁺ ڪنسنٽريشن: ايم پي کي وايو²⁺ 1 mM کان 3 mM تائين رد عمل جي ھڪڙي سلسلي سان ڪنسنٽريشن 0.5 mM جي وقفي سان و Mg ۾ و Mg Mg جو تعين ڪرڻ لاءِ²⁺ هر ٽيمپليٽ ۽ پرائمر لاءِ توجه.

■ نامناسب پرائمر ڊيزائن ، ۽ ٽارگيٽ تسلسل ۾ ھومولوجي آھي غير ھدفاتي تسلسل سان. -designيهر ڊيزائين ڪرڻ وارا پرائمر.

عبرت: غير مخصوص وlائڻ

Phenomena: PCR amplification bands متضاد آھن متوقع سائيز سان ، يا ته وڏا يا نن ،ا ، يا ڪڏهن ڪڏهن specificئي مخصوص امپليفيشن بينڊ ۽ غير مخصوص امپليفيشن بينڊ.

A-1 پرائمر

pri غريب پرائمر جي خاصيت

-designيهر ڊيزائين ڪرڻ وارو پرائمر.

■ پرائمر جو ڪنسنٽريشن تمام گھڻو آھي ro مناسب طور تي وatايو وatي ڊيناتريشن جي درجه حرارت ۽ ڊگھو ڪرڻ وارو وقت.

A-2 مگ²⁺ توجه

Mg مگ²⁺ ڪنسنٽريشن تمام گھڻي آھي —— خاص طور تي Mg2+ ڪنسنٽريشن گھٽ ڪريو: Mg کي وايو²⁺ 1 mM کان 3 mM تائين رد عمل جي ھڪڙي سلسلي سان ڪنسنٽريشن 0.5 mM جي وقفي سان و Mg ۾ و Mg Mg جو تعين ڪرڻ لاءِ²⁺ هر ٽيمپليٽ ۽ پرائمر لاءِ توجه.

A-3 Thermostable polymerase

en ضرورت کان وzyيڪ انزائم جي مقدار en گھٽايو اينزيم جي مقدار کي مناسب طور تي 0.5 U جي وقفي تي.

A-4 انيلنگ جو گرمي پد

■ annealing گرمي پد تمام گھٽ آهي —— مناسب طور annealing گرمي پد و orائڻ يا adoptه-اسٽيج annealing طريقو اپنائڻ.

A-5 PCR سائيڪلون

many تمام گھڻا PCR چڪر PC PCR سائيڪلن جو تعداد گھٽايو.

سوال: پيچيده يا سمير بينڊ

A-1 پرائمرoor ناقص خاصيت the پرائمر کي -يهر ڊيزائين ڪرڻ ، پرائمر جي پوزيشن ۽ ڊيگھ تبديل ڪرڻ ان جي خاصيت و enhanceائڻ لاءِ يا نسٽ ٿيل PCR انجام ڏيو.

A-2 سانچو DNA

template ٽيمپليٽ خالص ناهي the ٽيمپليٽ کي صاف ڪريو يا ڊي اين اي ڪ purو صاف ڪرڻ جي ڪٽس سان.

A-3 مگ²⁺ توجه

—— ايم جي²⁺ ڪنسنٽريشن تمام گھڻي آھي Mg خاص طور تي Mg گھٽايو²⁺ ڪنسنٽريشن: ايم پي کي وايو²⁺ 1 mM کان 3 mM تائين رد عمل جي ھڪڙي سلسلي سان ڪنسنٽريشن 0.5 mM جي وقفي سان و Mg ۾ و Mg Mg جو تعين ڪرڻ لاءِ²⁺ هر ٽيمپليٽ ۽ پرائمر لاءِ توجه.

A-4 dNTP

- ڊي اين ٽي پيز جو ڪنسنٽريشن تمام گھڻو آھي - ڊي اين ٽي پي جو ڪنسنٽريشن مناسب طور تي گھٽ ڪريو

A-5 انيلنگ جو گرمي پد

oo تمام گھٽ annealing گرمي پد rop مناسب طور annealing گرمي پد ۾ اضافو

A-6 سائيڪلون

many تمام گھڻا چڪر cycle سائيڪل نمبر کي وايو

سوال: 50 μl PCR رد عمل واري نظام ۾ ڪيترو ٽيمپليٽ ڊي اين اي شامل ڪيو وي؟

سوال: ڊگھي ٽڪرن کي ڪيئن وايو وي؟

پهريون قدم آهي مناسب پوليميرس چونڊڻ جو. باقائده Taq پوليميرس 3'-5 'exonuclease سرگرمي جي کوٽ جي ڪري پروف ريڊ نٿو ٿي سگھي ، ۽ بي ترتيب ٽڪرن جي توسيع ڪارڪردگيءَ کي تمام گھٽ ڪندو. ان ڪري ، باقاعده Taq polymerase مؤثر طريقي سان ٽارگيٽ ٽڪرن کي وlائي نٿو سگھي 5 kb کان وڏو. Taq polymerase خاص ترميم سان يا highيو اعليٰ مخلص پوليمريز چونڊيو و beي ته جيئن وا extensionاري جي ڪارڪردگيءَ کي بھتر ڪري سگھجي ۽ ڊگھي ٽڪرا وlائڻ جي ضرورتن کي پورو ڪيو وي. ان کان علاوه ، ڊگھن ٽڪرن جي واl ويجھ لاءِ پڻ ضرورت آھي پرائمر ڊيزائن جي مناسب ترتيب ، ڊيناتوريشن ٽائيم ، ايڪسٽينشن ٽائيم ، بفر پي اي، ، وغيره. ٽيمپليٽ جي نقصان کي روڪڻ لاءِ ، 94 ° C تي atاھڻ جو وقت گھٽايو و 30ي 30 سيڪنڊ يا گھٽ في چڪر ۾ ، ۽ وقت و temperatureائڻ جو وقت 94 ° C تائين و ampڻ کان ا should 1 منٽ کان گھٽ ھجڻ گھرجي. ان کان علاوه ، و extensionائڻ جو گرمي پد تقريبا 68 68 ° C تي ۽ و extensionائڻ جو وقت kاھڻ 1 kb/منٽ جي شرح مطابق ڊگھي ٽڪرن جي اثرائتي ور ensure کي يقيني بڻائي سگھي ٿو.

سوال: پي سي آر جي وlائڻ واري ايمانداري کي ڪيئن وايو وي؟

پي سي آر وlائڻ جي غلطي جي شرح کي گھٽ ڪري سگھجي ٿو مختلف ڊي اين اي پوليميرس استعمال ڪري و highيڪ ايمانداري سان. ا allا تائين مليل س Taني طاق ڊي اين اي پوليميرسز مان ، پي ايف يو انزائم وٽ گھٽ ۾ گھٽ غلطي جي شرح ۽ س highest کان و fيڪ ايمانداري آھي (ڏسو جدول ڏسو). انزائم جي چونڊ کان علاوه ، محقق و PCيڪ گھٽ ڪري سگھن ٿا PCR ميوٽيشن جي شرح کي بهتر ڪندي رد عمل جي حالتن کي ، بشمول بفر جي جوڙجڪ کي بهتر ڪرڻ ، ٿرموسٽبل پوليميرز جي توسيع ۽ PCR سائيڪل نمبر کي بھتر ڪرڻ.

پنھنجو پيغام ھتي لکو ۽ اھو اسان ڏانھن موڪليو