بلڊ س Directو PCR ڪٽ

ٽارگيٽ جين جي تيزيءَ سان وlڻ س directlyو سنئون رت کي استعمال ڪندي بغير templateاھڻ جي.

ھي ڪٽ اپنائي ٿو ھڪڙي جينياتي طور تي engineاھيل اينٽي انبيبيٽر ڊي اين اي پوليميرس کي مؤثر طريقي سان و singleائڻ لاءِ انساني جينوم ۾ ھڪڙي ڪاپي جين کي. ھن ڪٽ ۾ بھترين آپريٽ ٿيل بفر سسٽم مدد ڪري ٿو پوليميرس کي سختي سان مزاحمت ڪرڻ ۾ PCR inhibitors جي روڪٿام ، اھڙي طرح س directlyو سنئون ڊي اين اي کي و bloodائي سگھي ٿو رت ۽ ثقافتي خاني کي ٽيمپليٽس طور استعمال ڪندي. ھي پراڊڪٽ ھلائڻ ۾ آسان آھي ۽ ان کي پيچيده مرحلن جي ضرورت نٿي پوي جھڙوڪ ڊي اين اي پاڪائيزيشن يا نمونہ اtرائي.
ھي کٽ مهيا ڪئي وئي آھي 2 × MasterMix جي طور تي ، ۽ رد عمل انجام ڏئي سگھجي ٿو ر simplyو بلڊ ٽيمپليٽ ۽ ساingئي سectionاڻڻ واري پرائمر کي شامل ڪندي. ان کي لاmو ڪري سگھجي ٿو ممالين جي ثقافتي خانن تي جيئن انسان ، چوٿون ، خنزير ، cattleور ۽ speciesيون جنسون ، گڏوگڏ تازو يا 4 ℃ cryopreserved س bloodو رت ، anticoagulant (EDTA ، citrate ، heparin) ، مائع رت جا دotsا ۽ خشڪ رت جا نشان. واٽمن 903 ۽ ايف ٽي اي ايليوٽ تجارتي ڪارڊن تي محفوظ ٿيل.

لي. نه	پيڪنگ سائيز
4992529	20 µl × 100 rxn
4992530	20 µl × 500 rxn

اسان کي اي ميل موڪليو

پيداوار جي تفصيل

تجرباتي مثال

سوال

پيداوار ٽيگ

خاصيتون

■ سادو ۽ تيز: PCR وlائڻ س directlyو سنئون انجام ڏئي سگھجي ٿو رت کي ٽيمپليٽ جي طور تي ، بنا ضرورت جي نمونن جي تياري جي مرحلن ۽ ڊي اين اي ڪctionڻ جي.
■ اعليٰ پاڪائي: نمونن جي ا -ئين علاج ۽ ڊي اين اي ڪctionڻ جي مرحلن کي canڏي مدد ڪري سگھي ٿي نمونن جي پار آلودگي کان بچڻ ۾.
■ و throughيڪ وهڪرو: وڏي پيماني تي نمونن لاءِ PCR جي س performedاڻپ ڪٽ کي 96/384-well PCR پليٽ سان ملائڻ سان ڪري سگهجي ٿي.
univers مضبوط عالمگيريت: ھي کٽ موثر طريقي سان و Gائي سگھي ٿي اعليٰ GC ٽڪرن يا ٽڪرن کي پيچيده ثانوي structureانچي سان ، ۽ وlائڻ جي ڊيگھ ٿي سگھي ٿي 5 kb تائين.
stress سخت د stressاءَ جي مزاحمت: ھي کٽ مختلف قسمن ۽ رت جي نمونن لاءِ لا appliedو ڪري سگھجي ٿو مختلف طريقن سان محفوظ.

ايپليڪيشنون

ھن ڪٽ جي PCR پراڊڪٽس تي مشتمل آھي ”A“ 3′-end تي ، جيڪو س directlyو سنئون TA ویکٹر ڪلوننگ لاءِ استعمال ڪري سگھجي ٿو. ھي ڪٽ استعمال ڪري سگھجي ٿو جينومڪ ڊي اين اي ٽڪرن جي واl لاءِ ، و through ۾ وput جينياتي تجزيو ۽ جينو ٽائپنگ (جيئن جين جي سectionاڻپ) تجزيو.

س Allئي شيون ODM/OEM لاءِ ڪسٽمائيز ٿي سگھن ٿيون. تفصيل لاءِ ،مھرباني ڪري ڪلڪ ڪريو ڪسٽمائيز سروس (ODM/OEM)

ا Previousيون: TIANcombi DNA Lyse & Det PCR Kit

ا Nextيون: ماؤس ٽشو س Directو PCR ڪٽ

	استعمال ڪندي انسان EDTA anticoagulation کي ٽيمپليٽ جي طور تي ، 4 جين مختلف GC مواد سان بلڊ س Directي PCR ڪٽ ذريعي وا ويا. PCR رد عمل جو نظام هو 20 μl ، ۽ 1 μl رت استعمال ڪيو ويو ٽيمپليٽ طور. M: TIANGEN مارڪر II 1: ٽڪرا سائيز 1090 bp ، GC مواد 68.1٪ 2: ٽڪرا سائيز 1915 bp ، GC مواد 70.4٪ 3: ٽڪرا سائيز 448 bp ، GC مواد 74.8٪ 4: ٽڪرا سائيز 1527 bp ، GC مواد 61.5٪. تجرباتي نتيجا: بلڊ س Directو PCR ڪٽ مؤثر طريقي سان و DNAائي سگھي ٿي ڊي اين اي جي ٽڪرن کي GC مواد سان 61.5٪ -74.8٪ جي حد تائين ، مشورو ڏئي ٿو ته اھو اعلي GC ٽڪرن کي وائڻ جي قابل آھي.
	استعمال ڪندي انسان EDTA anticoagulation کي ٽيمپليٽ جي طور تي ، 5 جين مختلف ڊگھائي (ActB ، Prp ، DN1.0 ، Hn2.0 ۽ Hn4.0) کي و Bloodايو ويو بلڊ س Directي PCR ڪٽ ذريعي. PCR رد عمل جو نظام هو 20 μl ، ۽ 1 μl رت استعمال ڪيو ويو ٽيمپليٽ طور. M: TIANGEN مارڪر II 1-3: 3 مختلف رت جا نمونا NTC: بغير پرائمر ڪنٽرول. تجرباتي نتيجا: بلڊ س Directو PCR ڪٽ ٽڪرن کي و kائي سگھي ٿي ڊگھائي سان 4 kb تائين ، مشورو ڏئي ٿي ته اھو ڊگھي ٽڪرن کي وائڻ جي قابل آھي.
	استعمال ڪندي انسان EDTA anticoagulation کي ٽيمپليٽ طور ، بلڊ س Directو PCR ڪٽ استعمال ڪيو ويو PCR جي bloodولا لاءِ مختلف رت جي نمونن جي. PCR رد عمل جو نظام هو 20 μl ، ۽ 1 μl رت استعمال ڪيو ويو ٽيمپليٽ طور. M: TIANGEN مارڪر II 1-9: رت جي لوڊشيڊنگ مقدار آهي 0.1 μl ، 0.2 μl ، 0.3 μl ، 0.4 μl ، 1 μl ، 2 μl ، 3 μl ، 4 μl ۽ 5 μl ، ترتيب سان؛ NTC: ڪنٽرول بغير ٽيمپليٽ جي تجرباتي نتيجا: بلڊ س Directو PCR ڪٽ رت جي مضبوط مزاحمت رکي ٿي ۽ رت جي نمونن کي و-5ائي سگھي ٿي لوڊنگ رينج سان 0.1-5 μl جي.
	رت جا نمونا انسان ، چوٿا ، ڪڪڙ ۽ speciesين ذاتين کان مختلف علاج سان استعمال ڪيا ويا. بلڊ س Directو PCR ڪٽ استعمال ڪيو ويو و PRائڻ لاءِ PRNP (انسان ، 750 bp) ، Actin (rat ، 200 bp) ، ۽ β-actin (ڪڪڙ ، 1.0 kb). PCR رد عمل جو نظام هو 20 μl ، ۽ 1 μl رت استعمال ڪيو ويو ٽيمپليٽ طور. M: TIANGEN مارڪر II. تجرباتي نتيجا: رت جي س PCي PCR ڪٽ کي نمونن جي وسيع رينج تي لا beو ڪري سگھجي ٿو ، ۽ س PCو PCR ectionولڻ مختلف نمونن سان مختلف نمونن جي رت جي نمونن تي ڪري سگھجي ٿو.

سوال: ڪوبه وlائڻ وارو بئنڊ ناهي

A-1 سانچو

■ ٽيمپليٽ تي مشتمل آھي پروٽين جون نجاستون يا Taq inhibitors.

template ٽيمپليٽ جي atاھڻ مڪمل نه آھي —— مناسب طور تي وatايو وatي atاھڻ جي درجه حرارت ۽ ڊگھو atاھڻ جو وقت.

■ ٽيمپليٽ خراب ڪرڻ the ٽيمپليٽ -يهر تيار ڪريو.

A-2 پرائمر

pri پرائمر جي ناقص معيار e پرائمر کي -يھر ھرايو.

■ پرائمر تباھي —— اعلي ڪنسنٽريشن پرائمر کي بچايو نن smallي مقدار ۾. گھڻن منجمد ۽ پگھلڻ کان پاسو ڪريو يا ڊگھي عرصي تائين 4 ° C cryopreserved.

pri پرائمر جي نامناسب ڊيزائن (مثال طور پرائمر جي ڊيگھ ڪافي ناھي ، پرائمر جي وچ ۾ imeھيل ڊيمر وغيره) -ري ڊيزائين پرائمر (پرائمر ڊيمر ۽ سيڪنڊري ساخت جي avoidاھڻ کان پاسو ڪريو)

A-3 مگ²⁺توجه

■ مگ²⁺ ڪنسنٽريشن تمام گھٽ آهي ro خاص طور تي Mg و increaseايو²⁺ڪنسنٽريشن: ايم پي کي وايو²⁺ 1 mM کان 3 mM تائين رد عمل جي ھڪڙي سلسلي سان ڪنسنٽريشن 0.5 mM جي وقفي سان و Mg ۾ و Mg Mg جو تعين ڪرڻ لاءِ²⁺ هر ٽيمپليٽ ۽ پرائمر لاءِ توجه.

A-4 انيلنگ جو گرمي پد

■ تيز annealing گرمي پد کي متاثر ڪري ٿو پرائمر ۽ ٽيمپليٽ جي پابند. -انيلنگ جي درجه حرارت کي گھٽايو ۽ حالت کي بهتر ڪريو 2 ° C جي درجه بندي سان.

A-5 وensionائڻ جو وقت

■ مختصر توسيع وقت extension و extensionائڻ جو وقت وايو.

سوال: ڪوڙو مثبت

Phenomena: منفي نمونا پڻ ڏيکارين ٿا ٽارگيٽ تسلسل بينڊ.

PCR جي A-1 آلودگي

target ٽارگيٽ تسلسل يا وlائڻ وارين شين جي پار آلودگي fully احتياط سان پائپ نه ڪيو و targetي ٽارگيٽ تسلسل وارو نمونو منفي نموني ۾ يا انھن کي اrليو سينٽرفيوج ٽيوب مان. ريجينٽس يا سامان پاڻمرادو beھيل ھئڻ گھرجي موجوده نيوڪليڪ ايسڊز کي ختم ڪرڻ لاءِ ، ۽ آلودگيءَ جو وجود منفي ڪنٽرول تجربن ذريعي طئي ٿيڻ گھرجي.

■ Reagent contamination liAliquot reagents ۽ اسٽور گھٽ درجه حرارت تي.

A-2 وزيراعظمr

■ مگ²⁺ ڪنسنٽريشن تمام گھٽ آهي ro خاص طور تي Mg و increaseايو²⁺ ڪنسنٽريشن: ايم پي کي وايو²⁺ 1 mM کان 3 mM تائين رد عمل جي ھڪڙي سلسلي سان ڪنسنٽريشن 0.5 mM جي وقفي سان و Mg ۾ و Mg Mg جو تعين ڪرڻ لاءِ²⁺ هر ٽيمپليٽ ۽ پرائمر لاءِ توجه.

■ نامناسب پرائمر ڊيزائن ، ۽ ٽارگيٽ تسلسل ۾ ھومولوجي آھي غير ھدفاتي تسلسل سان. -designيهر ڊيزائين ڪرڻ وارا پرائمر.

عبرت: غير مخصوص وlائڻ

Phenomena: PCR amplification bands متضاد آھن متوقع سائيز سان ، يا ته وڏا يا نن ،ا ، يا ڪڏهن ڪڏهن specificئي مخصوص امپليفيشن بينڊ ۽ غير مخصوص امپليفيشن بينڊ.

A-1 پرائمر

pri غريب پرائمر جي خاصيت

-designيهر ڊيزائين ڪرڻ وارو پرائمر.

■ پرائمر جو ڪنسنٽريشن تمام گھڻو آھي ro مناسب طور تي وatايو وatي ڊيناتريشن جي درجه حرارت ۽ ڊگھو ڪرڻ وارو وقت.

A-2 مگ²⁺ توجه

Mg مگ²⁺ ڪنسنٽريشن تمام گھڻي آھي —— خاص طور تي Mg2+ ڪنسنٽريشن گھٽ ڪريو: Mg کي وايو²⁺ 1 mM کان 3 mM تائين رد عمل جي ھڪڙي سلسلي سان ڪنسنٽريشن 0.5 mM جي وقفي سان و Mg ۾ و Mg Mg جو تعين ڪرڻ لاءِ²⁺ هر ٽيمپليٽ ۽ پرائمر لاءِ توجه.

A-3 Thermostable polymerase

en ضرورت کان وzyيڪ انزائم جي مقدار en گھٽايو اينزيم جي مقدار کي مناسب طور تي 0.5 U جي وقفي تي.

A-4 انيلنگ جو گرمي پد

■ annealing گرمي پد تمام گھٽ آهي —— مناسب طور annealing گرمي پد و orائڻ يا adoptه-اسٽيج annealing طريقو اپنائڻ.

A-5 PCR سائيڪلون

many تمام گھڻا PCR چڪر PC PCR سائيڪلن جو تعداد گھٽايو.

سوال: پيچيده يا سمير بينڊ

A-1 پرائمرoor ناقص خاصيت the پرائمر کي -يهر ڊيزائين ڪرڻ ، پرائمر جي پوزيشن ۽ ڊيگھ تبديل ڪرڻ ان جي خاصيت و enhanceائڻ لاءِ يا نسٽ ٿيل PCR انجام ڏيو.

A-2 سانچو DNA

template ٽيمپليٽ خالص ناهي the ٽيمپليٽ کي صاف ڪريو يا ڊي اين اي ڪ purو صاف ڪرڻ جي ڪٽس سان.

A-3 مگ²⁺ توجه

—— ايم جي²⁺ ڪنسنٽريشن تمام گھڻي آھي Mg خاص طور تي Mg گھٽايو²⁺ ڪنسنٽريشن: ايم پي کي وايو²⁺ 1 mM کان 3 mM تائين رد عمل جي ھڪڙي سلسلي سان ڪنسنٽريشن 0.5 mM جي وقفي سان و Mg ۾ و Mg Mg جو تعين ڪرڻ لاءِ²⁺ هر ٽيمپليٽ ۽ پرائمر لاءِ توجه.

A-4 dNTP

- ڊي اين ٽي پيز جو ڪنسنٽريشن تمام گھڻو آھي - ڊي اين ٽي پي جو ڪنسنٽريشن مناسب طور تي گھٽ ڪريو

A-5 انيلنگ جو گرمي پد

oo تمام گھٽ annealing گرمي پد rop مناسب طور annealing گرمي پد ۾ اضافو

A-6 سائيڪلون

many تمام گھڻا چڪر cycle سائيڪل نمبر کي وايو

سوال: 50 μl PCR رد عمل واري نظام ۾ ڪيترو ٽيمپليٽ ڊي اين اي شامل ڪيو وي؟

سوال: ڊگھي ٽڪرن کي ڪيئن وايو وي؟

پهريون قدم آهي مناسب پوليميرس چونڊڻ جو. باقائده Taq پوليميرس 3'-5 'exonuclease سرگرمي جي کوٽ جي ڪري پروف ريڊ نٿو ٿي سگھي ، ۽ بي ترتيب ٽڪرن جي توسيع ڪارڪردگيءَ کي تمام گھٽ ڪندو. ان ڪري ، باقاعده Taq polymerase مؤثر طريقي سان ٽارگيٽ ٽڪرن کي وlائي نٿو سگھي 5 kb کان وڏو. Taq polymerase خاص ترميم سان يا highيو اعليٰ مخلص پوليمريز چونڊيو و beي ته جيئن وا extensionاري جي ڪارڪردگيءَ کي بھتر ڪري سگھجي ۽ ڊگھي ٽڪرا وlائڻ جي ضرورتن کي پورو ڪيو وي. ان کان علاوه ، ڊگھن ٽڪرن جي واl ويجھ لاءِ پڻ ضرورت آھي پرائمر ڊيزائن جي مناسب ترتيب ، ڊيناتوريشن ٽائيم ، ايڪسٽينشن ٽائيم ، بفر پي اي، ، وغيره. ٽيمپليٽ جي نقصان کي روڪڻ لاءِ ، 94 ° C تي atاھڻ جو وقت گھٽايو و 30ي 30 سيڪنڊ يا گھٽ في چڪر ۾ ، ۽ وقت و temperatureائڻ جو وقت 94 ° C تائين و ampڻ کان ا should 1 منٽ کان گھٽ ھجڻ گھرجي. ان کان علاوه ، و extensionائڻ جو گرمي پد تقريبا 68 68 ° C تي ۽ و extensionائڻ جو وقت kاھڻ 1 kb/منٽ جي شرح مطابق ڊگھي ٽڪرن جي اثرائتي ور ensure کي يقيني بڻائي سگھي ٿو.

سوال: پي سي آر جي وlائڻ واري ايمانداري کي ڪيئن وايو وي؟

پي سي آر وlائڻ جي غلطي جي شرح کي گھٽ ڪري سگھجي ٿو مختلف ڊي اين اي پوليميرس استعمال ڪري و highيڪ ايمانداري سان. ا allا تائين مليل س Taني طاق ڊي اين اي پوليميرسز مان ، پي ايف يو انزائم وٽ گھٽ ۾ گھٽ غلطي جي شرح ۽ س highest کان و fيڪ ايمانداري آھي (ڏسو جدول ڏسو). انزائم جي چونڊ کان علاوه ، محقق و PCيڪ گھٽ ڪري سگھن ٿا PCR ميوٽيشن جي شرح کي بهتر ڪندي رد عمل جي حالتن کي ، بشمول بفر جي جوڙجڪ کي بهتر ڪرڻ ، ٿرموسٽبل پوليميرز جي توسيع ۽ PCR سائيڪل نمبر کي بھتر ڪرڻ.

پنھنجو پيغام ھتي لکو ۽ اھو اسان ڏانھن موڪليو