GMO فصل ڪractionڻ ۽ وmpائڻ وارو کٽ

خاص طور تي مناسب GMO فصل ڪctionڻ ۽ ٽرانسجينڪ PCR ectionولڻ لاءِ.

GMO فصلن کي ڪractionڻ ۽ وmpائڻ وارو کٽ خاص طور تي GMO فصلن جي PCR ectionولڻ لاءِ تيار ڪيو ويو آھي. کٽ جي پارٽ اي ۾ موجود منفرد ليسس بفر خاص طور تي مکيه فصلن يعني ڪڻڪ ، ڪڻڪ ، چانور ، ڪپهه ۽ سويابين جي ٽشوز کي لائيز ڪري سگھي ٿو ، لا relatedاپيل جزا nuڏڻ لاءِ جيئن نيوڪلڪ ايسڊ ۽ پروٽين. فينول/ڪلوروفارم ڪctionڻ مخصوص RNase سان ملايو و highي ٿو اعليٰ پاڪائي وارو جينومڪ ڊي اين اي صاف ڪري سگھي ٿو نجاستن جهڙوڪ آر اين اي ، پروٽين ۽ دھاتي آئنن سان. پاڪ ٿيل ڊي اين اي لا appliedو ڪري سگھجي ٿو بعد ۾ پي سي آر جي ectionولا ۾. کٽ جو حصو B ھڪڙو -ن حصن وارو سادو PCR رد عمل وارو نظام آھي جنھن ۾ 2 × GMO PCR بفر ۽ GMO DNA پوليميرس شامل آھن. GMO DNA Polymerase هڪ thermostable polymerase آهي جيڪو اينٽي باڊيز سان تبديل ڪيو ويو آهي. 2 × GMO PCR بفر ۾ مختلف جزا شامل آھن جهڙوڪ MgCl₂، dNTPs ، PCR رد عمل اسٽيبلائيزر ، اصلاح ڏيندڙ ۽ وcerائيندڙ 2 × GMO جي ڪنسنٽريشن تي. ان ۾ فائدا آھن تيز ۽ سادي آپريشن ، اعليٰ حساسيت ، مضبوط خاصيت ، س stabilityي استحڪام ، وغيره. اھو استعمال ڪري سگھجي ٿو حصو A سان گڏ GMO فصلن جي ٽرانجينڪ PCR جي سectionاڻپ لاءِ.

لي. نه	پيڪنگ سائيز
4992905	200 روبل

اسان کي اي ميل موڪليو

پيداوار جي تفصيل

تجرباتي مثال

سوال

پيداوار ٽيگ

خاصيتون

applic وسيع اطلاق: ھي ڪٽ اعليٰ معيار جو جينومڪ ڊي اين اي ڪ fiveي سگھي ٿو پنجن وڏن GMO فصلن مان.
■ سادو ۽ تيز: GMO فصلن جي جينومي DNA ڪctionڻ 2 ڪلاڪن اندر مڪمل ٿي سگھي ٿو. ڪابه ضرورت ناهي وڏي ريفريجريٽرڊ سينٽري فيوجز ، اوزارن ۽ سامان جي گهٽ گهرجن. مناسب آهي تيزيءَ سان جينومڪ DNA ڪctionڻ جي GMO فصلن جي تحقيقي ادارن جي س levelsني سطحن تي.
■ اعليٰ ڪارڪردگي ۽ خاصيت: اينٽي باڊي ۾ تبديل ٿيل طاق پوليمريز جو منفرد بفر يقيني بڻائي ٿو موثر پوليميرس امپليفيشن ، جيڪو عام طاق پوليميرس کان و specificيڪ مخصوص آھي.

ايپليڪيشنون

ڪٽ اعلي GMO فصلن مان ڪڻڪ ، مکڻ ، چانور ، ڪپهه ۽ سويابين مان اعليٰ معيار جو جينومڪ ڊي اين اي ڪ extractي سگھي ٿي ، ۽ GMO فصلن تي ٽرانسجينڪ PCR ectionولڻ جو ڪم ڪري سگھي ٿي.

س Allئي شيون ODM/OEM لاءِ ڪسٽمائيز ٿي سگھن ٿيون. تفصيل لاءِ ،مھرباني ڪري ڪلڪ ڪريو ڪسٽمائيز سروس (ODM/OEM)

ا Previousيون: فاسٽ ڪنگ ون اسٽيپ RT-qPCR ڪٽ (پروب)

ا Nextيون: TIANcombi DNA Lyse & Det PCR Kit

جينومڪ ڊي اين اي ڪctionڻ
جينومڪ ڊي اين اي ڪctionڻ ڪيو ويو 100 ملي گرام پنن تي چانورن ، مکڻ ، سوياين ، ڪپهه ۽ ڪڻڪ جي. تجربو twiceه repeatedيرا ورجايو ويو. ڪل 100 μl آلودگي مان 3 μl DNA في لين لوڊ ڪيو ويو.
agarose gel جو ڪنسنٽريشن 2٪ ھو. اليڪٽرروفورسس ڪيو ويو 6 V/cm تحت 20 منٽ لاءِ.
D15000: TIANGEN D15000 DNA مارڪر.

PCR جي چڪاس
چانور ، مکڻ ، سوياين ، ڪپهه ۽ ڪڻڪ جو جينومڪ ڊي اين اي و ampايو ويو ، ترتيب سان. تجربو twiceه repeatedيرا ورجايو ويو. ڪل 20 μl رد عمل واري نظام مان 6 μl في لين لوڊ ڪيو ويو.
agarose gel جو ڪنسنٽريشن 2٪ ھو. اليڪٽرروفورسس ڪيو ويو 6 V/cm تحت 20 منٽ لاءِ.
D15000: TIANGEN D15000 DNA مارڪر.

سوال: ڪوبه وlائڻ وارو بئنڊ ناهي

A-1 سانچو

■ ٽيمپليٽ تي مشتمل آھي پروٽين جون نجاستون يا Taq inhibitors.

template ٽيمپليٽ جي atاھڻ مڪمل نه آھي —— مناسب طور تي وatايو وatي atاھڻ جي درجه حرارت ۽ ڊگھو atاھڻ جو وقت.

■ ٽيمپليٽ خراب ڪرڻ the ٽيمپليٽ -يهر تيار ڪريو.

A-2 پرائمر

pri پرائمر جي ناقص معيار e پرائمر کي -يھر ھرايو.

■ پرائمر تباھي —— اعلي ڪنسنٽريشن پرائمر کي بچايو نن smallي مقدار ۾. گھڻن منجمد ۽ پگھلڻ کان پاسو ڪريو يا ڊگھي عرصي تائين 4 ° C cryopreserved.

pri پرائمر جي نامناسب ڊيزائن (مثال طور پرائمر جي ڊيگھ ڪافي ناھي ، پرائمر جي وچ ۾ imeھيل ڊيمر وغيره) -ري ڊيزائين پرائمر (پرائمر ڊيمر ۽ سيڪنڊري ساخت جي avoidاھڻ کان پاسو ڪريو)

A-3 مگ²⁺توجه

■ مگ²⁺ ڪنسنٽريشن تمام گھٽ آهي ro خاص طور تي Mg و increaseايو²⁺ڪنسنٽريشن: ايم پي کي وايو²⁺ 1 mM کان 3 mM تائين رد عمل جي ھڪڙي سلسلي سان ڪنسنٽريشن 0.5 mM جي وقفي سان و Mg ۾ و Mg Mg جو تعين ڪرڻ لاءِ²⁺ هر ٽيمپليٽ ۽ پرائمر لاءِ توجه.

A-4 انيلنگ جو گرمي پد

■ تيز annealing گرمي پد کي متاثر ڪري ٿو پرائمر ۽ ٽيمپليٽ جي پابند. -انيلنگ جي درجه حرارت کي گھٽايو ۽ حالت کي بهتر ڪريو 2 ° C جي درجه بندي سان.

A-5 وensionائڻ جو وقت

■ مختصر توسيع وقت extension و extensionائڻ جو وقت وايو.

سوال: ڪوڙو مثبت

Phenomena: منفي نمونا پڻ ڏيکارين ٿا ٽارگيٽ تسلسل بينڊ.

PCR جي A-1 آلودگي

target ٽارگيٽ تسلسل يا وlائڻ وارين شين جي پار آلودگي fully احتياط سان پائپ نه ڪيو و targetي ٽارگيٽ تسلسل وارو نمونو منفي نموني ۾ يا انھن کي اrليو سينٽرفيوج ٽيوب مان. ريجينٽس يا سامان پاڻمرادو beھيل ھئڻ گھرجي موجوده نيوڪليڪ ايسڊز کي ختم ڪرڻ لاءِ ، ۽ آلودگيءَ جو وجود منفي ڪنٽرول تجربن ذريعي طئي ٿيڻ گھرجي.

■ Reagent contamination liAliquot reagents ۽ اسٽور گھٽ درجه حرارت تي.

A-2 وزيراعظمr

■ مگ²⁺ ڪنسنٽريشن تمام گھٽ آهي ro خاص طور تي Mg و increaseايو²⁺ ڪنسنٽريشن: ايم پي کي وايو²⁺ 1 mM کان 3 mM تائين رد عمل جي ھڪڙي سلسلي سان ڪنسنٽريشن 0.5 mM جي وقفي سان و Mg ۾ و Mg Mg جو تعين ڪرڻ لاءِ²⁺ هر ٽيمپليٽ ۽ پرائمر لاءِ توجه.

■ نامناسب پرائمر ڊيزائن ، ۽ ٽارگيٽ تسلسل ۾ ھومولوجي آھي غير ھدفاتي تسلسل سان. -designيهر ڊيزائين ڪرڻ وارا پرائمر.

عبرت: غير مخصوص وlائڻ

Phenomena: PCR amplification bands متضاد آھن متوقع سائيز سان ، يا ته وڏا يا نن ،ا ، يا ڪڏهن ڪڏهن specificئي مخصوص امپليفيشن بينڊ ۽ غير مخصوص امپليفيشن بينڊ.

A-1 پرائمر

pri غريب پرائمر جي خاصيت

-designيهر ڊيزائين ڪرڻ وارو پرائمر.

■ پرائمر جو ڪنسنٽريشن تمام گھڻو آھي ro مناسب طور تي وatايو وatي ڊيناتريشن جي درجه حرارت ۽ ڊگھو ڪرڻ وارو وقت.

A-2 مگ²⁺ توجه

Mg مگ²⁺ ڪنسنٽريشن تمام گھڻي آھي —— خاص طور تي Mg2+ ڪنسنٽريشن گھٽ ڪريو: Mg کي وايو²⁺ 1 mM کان 3 mM تائين رد عمل جي ھڪڙي سلسلي سان ڪنسنٽريشن 0.5 mM جي وقفي سان و Mg ۾ و Mg Mg جو تعين ڪرڻ لاءِ²⁺ هر ٽيمپليٽ ۽ پرائمر لاءِ توجه.

A-3 Thermostable polymerase

en ضرورت کان وzyيڪ انزائم جي مقدار en گھٽايو اينزيم جي مقدار کي مناسب طور تي 0.5 U جي وقفي تي.

A-4 انيلنگ جو گرمي پد

■ annealing گرمي پد تمام گھٽ آهي —— مناسب طور annealing گرمي پد و orائڻ يا adoptه-اسٽيج annealing طريقو اپنائڻ.

A-5 PCR سائيڪلون

many تمام گھڻا PCR چڪر PC PCR سائيڪلن جو تعداد گھٽايو.

سوال: پيچيده يا سمير بينڊ

A-1 پرائمرoor ناقص خاصيت the پرائمر کي -يهر ڊيزائين ڪرڻ ، پرائمر جي پوزيشن ۽ ڊيگھ تبديل ڪرڻ ان جي خاصيت و enhanceائڻ لاءِ يا نسٽ ٿيل PCR انجام ڏيو.

A-2 سانچو DNA

template ٽيمپليٽ خالص ناهي the ٽيمپليٽ کي صاف ڪريو يا ڊي اين اي ڪ purو صاف ڪرڻ جي ڪٽس سان.

A-3 مگ²⁺ توجه

—— ايم جي²⁺ ڪنسنٽريشن تمام گھڻي آھي Mg خاص طور تي Mg گھٽايو²⁺ ڪنسنٽريشن: ايم پي کي وايو²⁺ 1 mM کان 3 mM تائين رد عمل جي ھڪڙي سلسلي سان ڪنسنٽريشن 0.5 mM جي وقفي سان و Mg ۾ و Mg Mg جو تعين ڪرڻ لاءِ²⁺ هر ٽيمپليٽ ۽ پرائمر لاءِ توجه.

A-4 dNTP

- ڊي اين ٽي پيز جو ڪنسنٽريشن تمام گھڻو آھي - ڊي اين ٽي پي جو ڪنسنٽريشن مناسب طور تي گھٽ ڪريو

A-5 انيلنگ جو گرمي پد

oo تمام گھٽ annealing گرمي پد rop مناسب طور annealing گرمي پد ۾ اضافو

A-6 سائيڪلون

many تمام گھڻا چڪر cycle سائيڪل نمبر کي وايو

سوال: 50 μl PCR رد عمل واري نظام ۾ ڪيترو ٽيمپليٽ ڊي اين اي شامل ڪيو وي؟

سوال: ڊگھي ٽڪرن کي ڪيئن وايو وي؟

پهريون قدم آهي مناسب پوليميرس چونڊڻ جو. باقائده Taq پوليميرس 3'-5 'exonuclease سرگرمي جي کوٽ جي ڪري پروف ريڊ نٿو ٿي سگھي ، ۽ بي ترتيب ٽڪرن جي توسيع ڪارڪردگيءَ کي تمام گھٽ ڪندو. ان ڪري ، باقاعده Taq polymerase مؤثر طريقي سان ٽارگيٽ ٽڪرن کي وlائي نٿو سگھي 5 kb کان وڏو. Taq polymerase خاص ترميم سان يا highيو اعليٰ مخلص پوليمريز چونڊيو و beي ته جيئن وا extensionاري جي ڪارڪردگيءَ کي بھتر ڪري سگھجي ۽ ڊگھي ٽڪرا وlائڻ جي ضرورتن کي پورو ڪيو وي. ان کان علاوه ، ڊگھن ٽڪرن جي واl ويجھ لاءِ پڻ ضرورت آھي پرائمر ڊيزائن جي مناسب ترتيب ، ڊيناتوريشن ٽائيم ، ايڪسٽينشن ٽائيم ، بفر پي اي، ، وغيره. ٽيمپليٽ جي نقصان کي روڪڻ لاءِ ، 94 ° C تي atاھڻ جو وقت گھٽايو و 30ي 30 سيڪنڊ يا گھٽ في چڪر ۾ ، ۽ وقت و temperatureائڻ جو وقت 94 ° C تائين و ampڻ کان ا should 1 منٽ کان گھٽ ھجڻ گھرجي. ان کان علاوه ، و extensionائڻ جو گرمي پد تقريبا 68 68 ° C تي ۽ و extensionائڻ جو وقت kاھڻ 1 kb/منٽ جي شرح مطابق ڊگھي ٽڪرن جي اثرائتي ور ensure کي يقيني بڻائي سگھي ٿو.

سوال: پي سي آر جي وlائڻ واري ايمانداري کي ڪيئن وايو وي؟

پي سي آر وlائڻ جي غلطي جي شرح کي گھٽ ڪري سگھجي ٿو مختلف ڊي اين اي پوليميرس استعمال ڪري و highيڪ ايمانداري سان. ا allا تائين مليل س Taني طاق ڊي اين اي پوليميرسز مان ، پي ايف يو انزائم وٽ گھٽ ۾ گھٽ غلطي جي شرح ۽ س highest کان و fيڪ ايمانداري آھي (ڏسو جدول ڏسو). انزائم جي چونڊ کان علاوه ، محقق و PCيڪ گھٽ ڪري سگھن ٿا PCR ميوٽيشن جي شرح کي بهتر ڪندي رد عمل جي حالتن کي ، بشمول بفر جي جوڙجڪ کي بهتر ڪرڻ ، ٿرموسٽبل پوليميرز جي توسيع ۽ PCR سائيڪل نمبر کي بھتر ڪرڻ.

پنھنجو پيغام ھتي لکو ۽ اھو اسان ڏانھن موڪليو