2 ، طاق پلاٽينم پي سي آر مڪس
سرگرمي جي تعريف
1 يونٽ (يو) طاق پلاٽينم ڊي اين اي پوليميرس سرگرمي بيان ڪئي وئي آھي انزائم جي مقدار جي ضرورت آھي 10 اينمول ڊي آڪسائيڪليوٽائڊس کي شامل ڪرڻ لاءِ 10 m C تي 74 ° C تي 30 منٽ اندر ايڪٽيويٽ ٿيل سامن اسپرم ڊي اين اي کي ٽيمپليٽ/پرائمر طور استعمال ڪندي.
معيار تي ضابطو
پاڪائي SDS-PAGE جي سectionاڻپ کان و 99يڪ آهي 99٪؛ exogenous nuclease جي ڪابه سرگرمي نٿي لي انساني جينوم ۾ سنگل ڪاپي جين کي اثرائتو بڻائي سگھجي ٿو ڪابه اھم سرگرمي تبديل نٿي ٿئي جڏھن ذخيرو ٿيل ھجي ڪمري جي حرارت تي ھڪڙي ھفتي لاءِ.
مکيه ٽيڪنيڪل سميجي
ان ۾ آھي 5′-3 ′ exonuclease سرگرمي ۽ 3′-5 ′ exonuclease سرگرمي ، ۽ ان جي وفاداري Pfu پوليميرس جي ايان آھي. طاق پلاٽينم پوليمريز جي و extensionائڻ جي رفتار Pfu پوليميرس جي fasterيٽ ۾ تيز آھي ۽ وlائڻ جي ڪارڪردگي و higherيڪ آھي. PCR پروڊڪٽس کي س directlyو سنئون پ endاڙيءَ تائين بند ڪري سگھجي ٿو يا TA ویکٹر سان ڪلون ڪري سگھجي ٿو. جيڪڏھن ڪلوننگ جي ڪارڪردگيءَ کي بھتر بڻائڻ جي ضرورت آھي ، اھو تجويز ڪيو ويو آھي ته پھريائين پاڪ ڪيو و 3ي ۽ شامل ڪيو و'ي 3'-dA overhangs کان ا before ڪلون ڪرڻ کان اA TA ویکٹر ۾.
هڪ ٽيوب طاق پلاٽينم ماسٽر ميڪس (نيشنل هاءِ ٽيڪ پروڊڪٽ سرٽيفڪيشن)
q طاق پلاٽينم ماسٽر ميڪس PCR رد عمل جي خاصيت ۽ حساسيت کي بھتر ڪيو آھي ۽ پيچيده ٽيمپليٽس کي و Gائي سگھي ٿو اعلي GC مواد ، ثانوي structureانچي ۽ اھڙن سان. جيتري گھٽ ھجي ٽارگيٽ ٽيمپليٽ جون 2 ڪاپيون وlائي سگھجن ٿيون ، و ensيڪ درست تجرباتي نتيجن کي يقيني بنائڻ.
Ta منفرد طاق پلاٽينم ماسٽر ميڪس فارمولا reactionاھي ٿو س reactionو رد عمل جو نظام تمام مستحڪم ، ۽ سرگرمي متاثر نه ٿيندي بار بار فريزي ٿيڻ يا ڊگھي عرصي تائين اسٽوريج 4 ° C تي.
PC مستحڪم ۽ موثر ا pre ۾ تيار ٿيل PCR مخلوط حل ڪري سگھي ٿو آپريشن کي تيز ۽ سادو ، تمام گھٽ گھٽائي ٿو محنت جي شدت ۽ نموني جي غلطي کي. اعليٰ ڪارڪردگي وارو PCR وcerائيندڙ ۽ اصلاح ڏيندڙ پڻ ملاوٽ ۾ شامل آھن ، جيڪي PCR جي شرطن تي ضرورتن کي گھٽ ڪن ٿا.
■ ھن پراڊڪٽ ۾ yeئي رنگ وارا ۽ رنگ کان پاڪ نظام آھن. ڊائي تي مشتمل ماسٽر ميڪس پروڊڪٽس پي سي آر کان پوءِ س electroو سنئون اليڪٽرروفورس ٿي سگھن ٿيون ، بغير لوڊ ڪرڻ جي بفر کي شامل ڪرڻ جي.
ايپليڪيشنون
اھو بدلائي سگھي ٿو Pfu polymerase کي و fائڻ لاءِ اعليٰ وفاداريءَ واري شين کي پيچيده ٽيمپليٽس مان جيئن جينومز ، ۽ اھو مناسب آھي ايپليڪيشنن لاءِ جيئن ڪلوننگ آف ايڪسپيشن جينز ، سائيٽ مخصوص ميوٽيشنز ۽ تجزيو اڪيلو نيوڪليٽائڊ پوليمورفزم (SNP) ، وغيره.
PCR پرائمر Designاھڻ ۾ احتياطي تدبيرون:
پرائمر جي ڊيگھ عام طور تي 20-25 ميٽر آھي. بهرحال ، جڏهن ڊگهو ٽڪرو PCR انجام ڏئي رهيو آهي ، پرائمر جي ڊيگهه و increasedائي و 30ي 30-35 ميئر.
the priن پرائمرن جي وچ ۾ ڪابه پوري ڪرڻ وارو جوڙو ڪونھي ، خاص طور تي آخري 3 بنيادن لاءِ 3 ′ جي آخر ۾.
■ GC مواد 50-60٪ ھجڻ گھرجي ، ۽ مقامي امير GC يا AT کان پاسو ڪرڻ گھرجي. پرائمر ۽ ٽيمپليٽ کي مضبوطيءَ سان indاھڻ لاءِ ، 3. آخر ۾ AT رچيل ساخت کان پاسو ڪريو.
■ پرائمر کان پاسو ڪريو ثانوي structureانچو اھڻ لاءِ.
■ priه پرائمر منتخب ڪريو Tm گرمي پد سان ھڪ toئي جي ويجھو.
PCR لاءِ پرائمرن جي Tm ويليو جو حساب:
■ جڏھن پرائمر 20 ميئر کان گھٽ ھجي: Tm = 2 ° C × (A+T)+4 ° C × (G+C).
■ جڏھن پرائمر 20 ميٽر کان ويڪ ھجي: Tm = 81.5+0.41 G (GC٪)-600/L ، جتي L آھي پرائمر جي ڊيگھ.
■ انيلنگ جو گرمي پد مقرر ڪريو (Tm-5) C.
PCR پرائمر ان پٽ
پرائمر جي مناسب آخري ڪنسنٽريشن کي منتخب ڪري سگھجي ٿو 0.1 μM ۽ 1.0 μM جي وچ ۾. تمام گھٽ ھڪڙو پرائمر ڪنسنٽريشن و leadsائي ٿو گھٽ پيداوار و ampائڻ جي شين جي ، جڏھن ته تمام گھڻو و priيڪ پرائمر جو ڪنسنٽريشن و moreيڪ آھي غير مخصوص امپليفيشن جو. عام طور تي ، جڏھن ٽيمپليٽ ڊي اين اي جو مقدار وڏو ھجي يا پيچيده ٽيمپليٽ ڊي اين اي (جھڙوڪ انساني جينوم ڊي اين اي) ھڪڙي ٽيمپليٽ طور استعمال ڪيو ويندو آھي ، پرائمر جو تعداد گھٽ ھجڻ گھرجي. جڏهن ٽيمپليٽ ڊي اين اي جو مقدار نن orو هجي يا سادو ٽيمپليٽ ڊي اين اي (مثال طور ، پلاسميڊ ڊي اين اي ، وغيره) استعمال ڪيو ويندو ٽيمپليٽ طور ، پرائمر جو تعداد و beيڪ هجڻ گهرجي.
س Allئي شيون ODM/OEM لاءِ ڪسٽمائيز ٿي سگھن ٿيون. تفصيل لاءِ ،مھرباني ڪري ڪلڪ ڪريو ڪسٽمائيز سروس (ODM/OEM)
  |
استعمال ڪريو جينومڪ ڊي اين اي کي ٽيمپليٽ طور 1 kb ٽڪرا وlائڻ لاءِ. PCR رد عمل کان پوءِ ، اليڪٽرروفورسس جي چڪاس لاءِ 5 μl وو. |
A-1 سانچو
■ ٽيمپليٽ تي مشتمل آھي پروٽين جون نجاستون يا Taq inhibitors.
template ٽيمپليٽ جي atاھڻ مڪمل نه آھي —— مناسب طور تي وatايو وatي atاھڻ جي درجه حرارت ۽ ڊگھو atاھڻ جو وقت.
■ ٽيمپليٽ خراب ڪرڻ the ٽيمپليٽ -يهر تيار ڪريو.
A-2 پرائمر
pri پرائمر جي ناقص معيار e پرائمر کي -يھر ھرايو.
■ پرائمر تباھي —— اعلي ڪنسنٽريشن پرائمر کي بچايو نن smallي مقدار ۾. گھڻن منجمد ۽ پگھلڻ کان پاسو ڪريو يا ڊگھي عرصي تائين 4 ° C cryopreserved.
pri پرائمر جي نامناسب ڊيزائن (مثال طور پرائمر جي ڊيگھ ڪافي ناھي ، پرائمر جي وچ ۾ imeھيل ڊيمر وغيره) -ري ڊيزائين پرائمر (پرائمر ڊيمر ۽ سيڪنڊري ساخت جي avoidاھڻ کان پاسو ڪريو)
A-3 مگ2+توجه
■ مگ2+ ڪنسنٽريشن تمام گھٽ آهي ro خاص طور تي Mg و increaseايو2+ ڪنسنٽريشن: ايم پي کي وايو2+ 1 mM کان 3 mM تائين رد عمل جي ھڪڙي سلسلي سان ڪنسنٽريشن 0.5 mM جي وقفي سان و Mg ۾ و Mg Mg جو تعين ڪرڻ لاءِ2+ هر ٽيمپليٽ ۽ پرائمر لاءِ توجه.
A-4 انيلنگ جو گرمي پد
■ تيز annealing گرمي پد کي متاثر ڪري ٿو پرائمر ۽ ٽيمپليٽ جي پابند. -انيلنگ جي درجه حرارت کي گھٽايو ۽ حالت کي بهتر ڪريو 2 ° C جي درجه بندي سان.
A-5 وensionائڻ جو وقت
■ مختصر توسيع وقت extension و extensionائڻ جو وقت وايو.
Phenomena: منفي نمونا پڻ ڏيکارين ٿا ٽارگيٽ تسلسل بينڊ.
PCR جي A-1 آلودگي
target ٽارگيٽ تسلسل يا وlائڻ وارين شين جي پار آلودگي fully احتياط سان پائپ نه ڪيو و targetي ٽارگيٽ تسلسل وارو نمونو منفي نموني ۾ يا انھن کي اrليو سينٽرفيوج ٽيوب مان. ريجينٽس يا سامان پاڻمرادو beھيل ھئڻ گھرجي موجوده نيوڪليڪ ايسڊز کي ختم ڪرڻ لاءِ ، ۽ آلودگيءَ جو وجود منفي ڪنٽرول تجربن ذريعي طئي ٿيڻ گھرجي.
■ Reagent contamination liAliquot reagents ۽ اسٽور گھٽ درجه حرارت تي.
A-2 وزيراعظمr
■ مگ2+ ڪنسنٽريشن تمام گھٽ آهي ro خاص طور تي Mg و increaseايو2+ ڪنسنٽريشن: ايم پي کي وايو2+ 1 mM کان 3 mM تائين رد عمل جي ھڪڙي سلسلي سان ڪنسنٽريشن 0.5 mM جي وقفي سان و Mg ۾ و Mg Mg جو تعين ڪرڻ لاءِ2+ هر ٽيمپليٽ ۽ پرائمر لاءِ توجه.
■ نامناسب پرائمر ڊيزائن ، ۽ ٽارگيٽ تسلسل ۾ ھومولوجي آھي غير ھدفاتي تسلسل سان. -designيهر ڊيزائين ڪرڻ وارا پرائمر.
Phenomena: PCR amplification bands متضاد آھن متوقع سائيز سان ، يا ته وڏا يا نن ،ا ، يا ڪڏهن ڪڏهن specificئي مخصوص امپليفيشن بينڊ ۽ غير مخصوص امپليفيشن بينڊ.
A-1 پرائمر
pri غريب پرائمر جي خاصيت
-designيهر ڊيزائين ڪرڻ وارو پرائمر.
■ پرائمر جو ڪنسنٽريشن تمام گھڻو آھي ro مناسب طور تي وatايو وatي ڊيناتريشن جي درجه حرارت ۽ ڊگھو ڪرڻ وارو وقت.
A-2 مگ2+ توجه
Mg مگ2+ ڪنسنٽريشن تمام گھڻي آھي —— خاص طور تي Mg2+ ڪنسنٽريشن گھٽ ڪريو: Mg کي وايو2+ 1 mM کان 3 mM تائين رد عمل جي ھڪڙي سلسلي سان ڪنسنٽريشن 0.5 mM جي وقفي سان و Mg ۾ و Mg Mg جو تعين ڪرڻ لاءِ2+ هر ٽيمپليٽ ۽ پرائمر لاءِ توجه.
A-3 Thermostable polymerase
en ضرورت کان وzyيڪ انزائم جي مقدار en گھٽايو اينزيم جي مقدار کي مناسب طور تي 0.5 U جي وقفي تي.
A-4 انيلنگ جو گرمي پد
■ annealing گرمي پد تمام گھٽ آهي —— مناسب طور annealing گرمي پد و orائڻ يا adoptه-اسٽيج annealing طريقو اپنائڻ.
A-5 PCR سائيڪلون
many تمام گھڻا PCR چڪر PC PCR سائيڪلن جو تعداد گھٽايو.
A-1 پرائمرoor ناقص خاصيت the پرائمر کي -يهر ڊيزائين ڪرڻ ، پرائمر جي پوزيشن ۽ ڊيگھ تبديل ڪرڻ ان جي خاصيت و enhanceائڻ لاءِ يا نسٽ ٿيل PCR انجام ڏيو.
A-2 سانچو DNA
template ٽيمپليٽ خالص ناهي the ٽيمپليٽ کي صاف ڪريو يا ڊي اين اي ڪ purو صاف ڪرڻ جي ڪٽس سان.
A-3 مگ2+ توجه
—— ايم جي2+ ڪنسنٽريشن تمام گھڻي آھي Mg خاص طور تي Mg گھٽايو2+ ڪنسنٽريشن: ايم پي کي وايو2+ 1 mM کان 3 mM تائين رد عمل جي ھڪڙي سلسلي سان ڪنسنٽريشن 0.5 mM جي وقفي سان و Mg ۾ و Mg Mg جو تعين ڪرڻ لاءِ2+ هر ٽيمپليٽ ۽ پرائمر لاءِ توجه.
A-4 dNTP
- ڊي اين ٽي پيز جو ڪنسنٽريشن تمام گھڻو آھي - ڊي اين ٽي پي جو ڪنسنٽريشن مناسب طور تي گھٽ ڪريو
A-5 انيلنگ جو گرمي پد
oo تمام گھٽ annealing گرمي پد rop مناسب طور annealing گرمي پد ۾ اضافو
A-6 سائيڪلون
many تمام گھڻا چڪر cycle سائيڪل نمبر کي وايو
پهريون قدم آهي مناسب پوليميرس چونڊڻ جو. باقائده Taq پوليميرس 3'-5 'exonuclease سرگرمي جي کوٽ جي ڪري پروف ريڊ نٿو ٿي سگھي ، ۽ بي ترتيب ٽڪرن جي توسيع ڪارڪردگيءَ کي تمام گھٽ ڪندو. ان ڪري ، باقاعده Taq polymerase مؤثر طريقي سان ٽارگيٽ ٽڪرن کي وlائي نٿو سگھي 5 kb کان وڏو. Taq polymerase خاص ترميم سان يا highيو اعليٰ مخلص پوليمريز چونڊيو و beي ته جيئن وا extensionاري جي ڪارڪردگيءَ کي بھتر ڪري سگھجي ۽ ڊگھي ٽڪرا وlائڻ جي ضرورتن کي پورو ڪيو وي. ان کان علاوه ، ڊگھن ٽڪرن جي واl ويجھ لاءِ پڻ ضرورت آھي پرائمر ڊيزائن جي مناسب ترتيب ، ڊيناتوريشن ٽائيم ، ايڪسٽينشن ٽائيم ، بفر پي اي، ، وغيره. ٽيمپليٽ جي نقصان کي روڪڻ لاءِ ، 94 ° C تي atاھڻ جو وقت گھٽايو و 30ي 30 سيڪنڊ يا گھٽ في چڪر ۾ ، ۽ وقت و temperatureائڻ جو وقت 94 ° C تائين و ampڻ کان ا should 1 منٽ کان گھٽ ھجڻ گھرجي. ان کان علاوه ، و extensionائڻ جو گرمي پد تقريبا 68 68 ° C تي ۽ و extensionائڻ جو وقت kاھڻ 1 kb/منٽ جي شرح مطابق ڊگھي ٽڪرن جي اثرائتي ور ensure کي يقيني بڻائي سگھي ٿو.
پي سي آر وlائڻ جي غلطي جي شرح کي گھٽ ڪري سگھجي ٿو مختلف ڊي اين اي پوليميرس استعمال ڪري و highيڪ ايمانداري سان. ا allا تائين مليل س Taني طاق ڊي اين اي پوليميرسز مان ، پي ايف يو انزائم وٽ گھٽ ۾ گھٽ غلطي جي شرح ۽ س highest کان و fيڪ ايمانداري آھي (ڏسو جدول ڏسو). انزائم جي چونڊ کان علاوه ، محقق و PCيڪ گھٽ ڪري سگھن ٿا PCR ميوٽيشن جي شرح کي بهتر ڪندي رد عمل جي حالتن کي ، بشمول بفر جي جوڙجڪ کي بهتر ڪرڻ ، ٿرموسٽبل پوليميرز جي توسيع ۽ PCR سائيڪل نمبر کي بھتر ڪرڻ.
مصنوعات جا اا
اسان کي Yو چونڊيو
ان جي قيام کان و ourي ، اسان جو ڪارخانو ترقي ڪري رھيو آھي پھريون عالمي درجي جون شيون اصول تي عمل ڪرڻ سان
معيار جي پهرين. اسان جي پروڊڪٽس حاصل ڪئي آھي صنعت ۾ شاندار ساک ۽ نئين ۽ پراڻن گراهڪن جي وچ ۾ قابل اعتماد اعتماد.
- ٽيليفون: +86 010-59822688
- بلڊنگ 5 ، نمبر 86 ، Shuangying ويسٽ روڊ ، Changping ضلعو ، بيجنگ.
- people@tiangen.com
